tcep 溶液，还原剂tcep 溶液，0.5m5ml操作步骤对于培养细胞样品：1. 融解 ripa 裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入 pmsf， 使 pmsf 的zui终浓度为 1mm。2. 裂解细胞 2.1 对于贴壁细胞：去除培养液，用 pbs、生理盐水或无培养液洗一遍。按照 6 孔板每孔加入 150-250 微升裂解液的比 例加入裂解液。用吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞 1-2 秒后，细胞就会被裂解。 2.2 对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照 6 孔板每孔细胞 加入150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分 裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成 50-100 万细胞/管， 然后再裂解。3. 充分裂解后，10000-14000g 离心 3-5 分钟，取上清，即可进行后续的 page、 western 和沉淀等操作。 注意：通常 6 孔板每孔细胞加入 150 微升裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高 可以适当加大裂解液的用量到 200 微升或 250 微升。
tcep 溶液，0.5m(tcep solution)操作步骤 获得含重组表达质粒的表达1、 将连接产物转化大肠dh5α，根据重组载体的标志（抗amp或蓝白斑）作筛选，大同还原剂tcep，挑取单斑，碱裂解法小量抽提质粒，双酶切初步鉴定。2、 测序验证目的基因的插入方向及阅读框架均正确，进入下步操作。否则应筛选更多，重复亚或亚至不同酶切位点。3、 以此重组质粒dna转化表达宿主菌的感受态细胞。---表达1、 tcep 溶液，0.5m(tcep solution)挑取含重组质粒的菌体单斑至2ml lb（含amp50μg/ml）中37℃过夜培养。2、按1∶50比例稀释过夜菌，一般将1ml菌加入到含50mllb培养基的300ml培养瓶中， 37℃震荡培养至od600≌0.4-1.0（*0.6，大约需3hr）。3、取部分液体作为未---的对照组，余下的加入iptg---剂至终浓度0.4mm作为实验组，两组继续37℃震荡培养3hr。4、分别取菌体1ml， 离心12000g×30s收获沉淀，还原剂tcep报价，用100μl 1%sds重悬，混匀， 70℃10min。5、离心12000g×1min，取上清作为样品，可做sds-page等分析。
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tcep是一种非常有效的---类还原剂，广泛用作蛋白质化学及蛋白质组学研究中二硫键的定量还原剂。该试剂在水溶液中的稳定性和溶解性都---。在酸性、碱性溶液中的稳定性也---。与其他类别的---类还原剂如dtt相比，tcep不仅是一种的二硫键还原剂，而且在某些巯基的交联反应中不需要除掉。因而在蛋白质化学及蛋白质组学研究常常优先选择tcep。
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