长沙蛋白还原酶tcep-济南金泉化工

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    2023-11-3

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tcep 溶液,0.5m(tcep solution)操作步骤(一)获得目的基因1、通过pcr方法:以含目的基因的质粒为模板,按基因序列设计一对引物(在上游和下游引物分别引入不同的酶切位点),pcr循环获得所需基因片段。2、通过rt-pcr方法:用trizol法从细胞或组织中提取总rna,以mrna为模板,逆转录形成cdna链,以逆转录产物为模板进行pcr循环获得产物。(二)构建重组表达载体1、tcep 溶液,蛋白还原酶tcep多少钱,0.5m(tcep solution)载体酶切:将表达质粒用---性内切酶(同引物的酶切位点)进行双酶切,酶切产物行琼脂糖电泳后,用胶回收kit或冻融法回收载体大片段。2、pcr产物双酶切后回收,在t4dna连接酶作用下连接入载体。
















tcep 溶液,长沙蛋白还原酶tcep,0.5m5ml操作步骤对于培养细胞样品:1. 融解 ripa 裂解液,混匀。取适当量的裂解液,蛋白还原酶tcep报价,在使用前数分钟内加入 pmsf, 使 pmsf 的zui终浓度为 1mm。2. 裂解细胞 2.1 对于贴壁细胞:去除培养液,用 pbs、生理盐水或无培养液洗一遍。按照 6 孔板每孔加入 150-250 微升裂解液的比 例加入裂解液。用吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞 1-2 秒后,细胞就会被裂解。 2.2 对于悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照 6 孔板每孔细胞 加入150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分 裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成 50-100 万细胞/管, 然后再裂解。3. 充分裂解后,10000-14000g 离心 3-5 分钟,取上清,即可进行后续的 page、 western 和沉淀等操作。 注意:通常 6 孔板每孔细胞加入 150 微升裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高 可以适当加大裂解液的用量到 200 微升或 250 微升。







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